Streptomyces coelicolor 膜小胞が持つ DNA 配列の解明

Scientific Reports volume 12、記事番号: 16651 (2022) この記事を引用

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膜小胞 (MV) は、ナノスケールの寸法をもつ球状粒子であり、核酸、タンパク質、脂質、細胞代謝産物などの多様な積荷の存在を特徴とします。 MV を生成する (微生物) 生物の多くの例が文献で報告されています。 それらの中で、細菌の MV は現在、遺伝子水平伝達の 4 番目の機構として考えられているため、特に興味深いものとなっています。 Streptomyces 細菌は、生態学的役割と生理活性化合物を合成する能力でよく知られており、Streptomyces coelicolor がモデル生物です。 異なるタンパク質および代謝産物カーゴを特徴とする異なる MV 集団を生成できることが以前に実証されました。 この研究で我々は、S.セリカラーのMVがDNAとRNAの両方を保持していること、そしてそれらのDNA内容が細菌の染色体全体を表すことを初めて実証した。 これらの発見は、MV DNA がストレプトミセス ゲノムの進化に役割を果たしている可能性があり、MV が新しい菌株工学戦略に利用できる可能性があることを示唆しています。

細菌膜小胞 (MV) は、直径がナノメートルの球状の膜状粒子であり、その積荷には、核酸 (DNA および RNA)、脂質、タンパク質 (つまり、酵素や毒素) などのさまざまな高分子と、細胞などの小分子が含まれます。代謝産物、シグナル、生理活性分子（抗生物質など）1、2、3、4。 MV の放出は、栄養素の摂取、競争、生存、ストレス応答、細胞間コミュニケーション、水平遺伝子伝達 (HGT) などの多くの生物学的機能を促進します 1,3,5。 遺伝子とゲノムの形成とその進化を推進する主要な力の 1 つとして認識されている HGT の文脈では、MV は（非常に）重要な役割を果たす可能性があります。 原核生物における HGT の主な研究機構は、形質転換、接合、および形質導入です 6,7。 しかし、近年、MV は vesiduction5、8、9、10 と呼ばれる HGT の 4 番目のメカニズムであると考えられています。 実際、染色体、プラスミド、および/またはファージ DNA などのさまざまな種類の遺伝物質が、sRNA、mRNA、miRNA とともに MV の内部または膜と結合して検出されています 5、8、9、11。 MV を介した HGT の発生は多くの研究で観察されている。例えば、Klieve et al.12 は、Ruminococcus 属に属するグラム陽性細菌によって放出される MV と DNA の関連性を初めて実証した。これらの MV を使用して、変異株の特定の代謝活性を回復します12。 さらに、MV は異なる菌株間でプラスミドを輸送し 13、14、DNA カーゴを真核宿主細胞に輸送することが報告されています 15。

さらに、細胞外 DNA (eDNA) は、バイオフィルム形成の初期段階での細胞接着を可能にする細菌バイオフィルム マトリックスの重要な構成要素です。 Streptococcus mutans の浮遊細胞では、MV が関与する溶解非依存性モードによっても eDNA が放出されます。 したがって、浮遊培養物のMV中のeDNAは、細菌の定着を促進するバイオフィルム形成の初期段階で何らかの役割を果たしている可能性があります。 さらに、MV eDNA はバイオフィルムの構造的完全性と安定性に影響を与えることが報告されています 16。

1972 年から 2021 年の間に実施された原核生物の膜小胞に関する研究のうち、グラム陽性菌の MV に関係するものはわずか 4% でした 17: 実際、グラム陽性菌は外側の膜が欠如しているため、小胞を生成できないと長い間考えられてきました。膜層と厚い細胞壁の存在1。 近年、グラム陽性MVがさらに注目を集めており、それらの放出が、ブドウ球菌属、桿菌属、乳酸桿菌属、およびストレプトマイセス属などの病原性株および非病原性株の両方で実証されています4、18、19。 20、21。

Streptomyces は、陸地および海洋環境に遍在する糸状グラム陽性細菌の属であり、植物、菌類、昆虫、海綿体などと共生することができます 22: このような多様な生態学的ニッチへの適応と他の生物との相互作用 (微生物は、その生理活性代謝物の独特な化学的多様性をもたらし、その生産は、栄養素の不足や競合者の存在などの環境信号の複雑なネットワークによって制御されています22、23、24。 放線菌は、コロニーの菌糸体が異なる細胞型 (栄養菌糸、気菌糸、胞子など) やさらには異なる部分集団によって形成されるため、複雑な生活環を持っています。実際、放線菌のコロニーは、最近、社会性昆虫のコロニーに似ていると記載されています。線状染色体の腕の欠失および/または増幅を特徴とし、自らの適応度を犠牲にして抗生物質を過剰に生産する変異細胞集団が存在するため、分業が必要となる。

これらの細菌では、抱合は HGT の最も研究されているメカニズムであり、1950 年代から原栄養株と栄養要求性変異体を含む実験で研究されてきました 27、28、29。 Streptomyces における接合の特異な特徴は、いわゆるあばたが形成されることです。プラスミドを保有する株の胞子を過剰なレシピエント株の胞子と共培養すると、レシピエントの菌糸芝生に成長遅延の円形ゾーンが形成されます。観察された30。 ポッキング表現型は、pock30を形成する細胞内にドナープラスミドが見出されたため、プラスミド転移と関連していた。 さらに、単細胞細菌では、接合プラスミドは複数のタンパク質が関与するIV型分泌系を介してドナーからレシピエントに一本鎖DNAとして移送されますが、ストレプトミセス属の接合は二本鎖DNAと接合プラスミドによってコードされるタンパク質の移入で構成されます。プラスミド (TraB など) が必要です 31,32,33,34,35,36。

Streptomyces coelicolor は、Streptomycetes 研究のモデル生物と考えられています。 我々はつい最近、液体培養で増殖させた S. セリカラーが、さまざまなサイズの、特定のタンパク質と代謝カーゴを含む MV を放出することを実証しました 4。 しかし、特定の DNA 断片または Streptomyces のゲノム配列全体が MV によって運ばれるかどうかはまだ明らかではありません。 したがって、この研究の目的は、染色体 DNA 全体が MV に関連しているかどうかを確認するために、S. coelicolor MV から精製された DNA の配列決定と分析を実行することでした。

MV の 2 つの主要な集団、すなわち F3 および F4 MV を、「材料と方法」で報告されたプロトコールに従って S. coelicolor の液体培養物から単離および精製しました。 これら 2 つの MV 集団は、以前に特徴付けられていました。直径が異なることに加えて (平均サイズは、F3 と F4 でそれぞれ約 100 nm と 200 nm でした)、タンパク質と代謝産物カーゴの組成も異なりました 4。 6 つのグラジエント画分すべてを 1% (w/v) アガロースゲルに直接ロードし、この電気泳動分析により 3 つの主要なバンドの存在が明らかになりました: それぞれ約 900 bp および 500 bp に対応する 2 つの小さなバンドと、より高い分子量のバンドです。約 19 kb です (図 1)。 以前の研究によれば、F3 と F4 は最も MV が豊富なグラジエント画分であるため、さらなる調査のために選択されました 4,37。 さらに、F3 と F4 における MV の存在は、動的光散乱 (DLS) 分析によって確認されました (補足図 S1)。

S.セリカラーMVの画分F3およびF4に関連する核酸の電気泳動分析。 M: DNA 分子量マーカー IV (Roche)。

3 つのバンドの相対強度は、2 つの MV 集団間で逆のパターンを示しました。F3 では、19 kb バンドが他のバンドに比べてより明るく見えましたが、F4 画分では 900 bp および 500 bp バンドの強度がより強かったです。高分子量バンドよりも。 F3 および F4 画分に存在する核酸を同定するために、それらを RNase または DNase で処理しました。 得られたデータにより、両方の画分の 2 つの小さなバンドが RNA に対応し、高分子量の核酸が DNA であることが明らかになりました (補足図 2)。

F3 および F4 の DNA 含量を特定することを目的とした PCR 実験は、S. coelicolor 染色体の異なる領域にマッピングされている遺伝子の一部を増幅することによって実行されました。 この目的のために、katA2、catC、dnaK、hrdB、およびrrnBが標的遺伝子として選択されました(図2)。

S.セリカラー A3(2) M145 染色体の地図。 katA2、catC、dnaK、hrdB、rrnB の位置が報告されています。 このマップは、GenBank でアクセッション番号 AL645882.2 で入手可能な S. coelicolor A3(2) の配列を使用して、ソフトウェア SnapGene Viewer で作成されました。

得られたデータは、予想されるサイズの5つのアンプリコンが両方の画分から得られたことを明らかにし、F3およびF4のDNA含有量がS.セリカラー染色体を反映していることを示唆しています（補足図S3）。

S. coelicolor 染色体のどの領域が MV に関連しているかを確認するために、F3 からの DNA の次世代シーケンシング (NGS) を実行しました。F3 は、最も DNA が豊富な画分であるため、この分析に選択されました。 DNA シーケンシングの結果、7,692,359 個のペアエンド配列が得られ、そのうち 3,831,272 個がトリミング ステップを通過しました。 アセンブリステップ中に 411 個のコンティグが得られ、N50 = 62,711 bp、GC% = 72.18%、全長 8,580,830 bp でした。 1000 bp より長く、合計 8,545,699 bp を占める 255 個のコンティグのみを、MeDuSa ソフトウェアを使用して実行したさらなる足場に使用しました (材料と方法を参照)。 得られた足場には、GC% = 72.07% および 128 のギャップを持つ 8,558,499 bp の単一コンティグが含まれていました。 平均ヌクレオチド同一性（ANI）分析により、組み立てられたゲノムが S. coelicolor に属していることが確認されました。実際、補足表 S2 に報告されているように、15 個の参照ゲノムのうち 13 個の ANI 値が 99.9% 以上でした。 最も低い 2 つの ANI 値は、おそらく対応する参照ゲノムの品質によるものです。 実際、それらはより多くのコンティグとより小さなN50値を持っていました（補足表S1〜S2）。

シーケンスリードを S. coelicolor A3(2) の参照染色体配列にマッピングした場合 (図 3)、PCR データによって示唆されるように、解析ではリードがゲノム配列全体をカバーしていることが示されました。

S. coelicolor A3(2) の参照染色体配列上のシーケンシングリードのマッピング。 (A) S. coelicolor A3(2) 染色体の配列範囲。 (B) 参照ゲノム AL645882.2 の位置 5,100,000 と 5,130,000 の間に含まれる領域のズーム。

平均読み取りカバレッジは 117.5 倍でしたが、染色体の約 17 kb の長さの領域 (アクセッション番号 AL645882.2 の参照ゲノムの 5,106,161 位から 5,122,930 位まで) が過剰に表現されており、局所平均カバレッジが 100 倍であったことは注目に値します。 1288.5X には、表 1 にリストされている 25 個の ORF が含まれます。

全体として、これらのデータは、MV 集団の DNA 含有量が S. coelicolor 染色体全体を代表するものであることを実証しました。

この研究の目的は、S. セリカラーの液体培養物から単離された MV の 2 つの主要な集団に核酸が含まれていることを初めて実証したため、S. セリカラーの MV によって運ばれる DNA カーゴの配列を決定し、分析することでした。 特に、それらのうちの１つ（すなわち、画分Ｆ３）はＤＮＡが豊富であり、もう１つ（すなわち、画分Ｆ４）はＲＮＡが豊富である。 さらに、DNA 配列決定により、画分 F3 の MV によって運ばれる DNA が S. coelicolor 全体を代表するものであることが実証されました。 この結果は、緑膿菌およびディノロセオバクター・シバエの外膜小胞（OMV）に関する以前の研究と一致しており、OMV に全ゲノムが存在することが示されています15,38。さらに、D. shibae では、外膜小胞の特定の DNA 領域が存在することが示されました。その染色体は過剰に表現されており、S. coelicolor38 で観察されたパターンを思い出させます。 ただし、D. shibae の場合、その領域には環状染色体の複製末端 (ter) が含まれており、過剰発現は過剰複製された DNA の修復によるものである可能性がありますが、この配列の富化が生物学的意味を持つかどうかはまだ明らかではありません。 S.セリカラーの場合。 たとえば、S. coelicolor 染色体のこの領域には、参照配列 39 の 4,269,853 ～ 4,272,747 に位置する複製起点 (oriC) も、~ oriC40を中心とする400 kbの領域。

まとめると、これらの発見は、(O)MV の産生がグラム陰性菌とグラム陽性菌の両方を包含する広範な HGT メカニズムを表し、遺伝子とゲノムの進化に寄与している可能性があるという概念を強化するものです。 Streptomyces 属は、ヒトの感染症の治療に使用される抗生物質を含む生理活性化合物の主要な生産者の 1 つです。 したがって、S. coelicolor MV における染色体 DNA の存在は、関連する興味深い問題です。 実際、抗生物質耐性遺伝子 (ARG) は通常、生合成遺伝子クラスターの一部であり、環境中に拡散し、病原体を含む他の細菌によって直接的または間接的に獲得される可能性があります。 この点に関して、Jiang ら 41 は、ストレプトミセス属からプロテオバクテリア (病原体を含む) までの ARG の HGT の可能性を示唆しています 41。

さまざまな研究により、DNA が MV の内腔および/または表面に局在する可能性があることが示唆されています。どちらの場合も、その局在とは関係なく、DNA は HGT9、15、42 を媒介できるようです。 (O)MV の表面に結合した DNA の場合でも、この DNA が HGT に関与していることが証明されました。たとえば、Porphyromonas gingivalis 由来の OMV の DNase 処理は遺伝子導入の効率を損なうことが報告されています 8,43。 MV に関連する DNA の局在は、おそらく生細胞か死にかけている細胞のいずれかに関する生合成に依存します。たとえば、後者の場合、DNA は放出された小胞の表面に付着することによって MV に結合する可能性もあります 44。 プログラムされた細胞死が知られており、これらの細菌の形態生理学的分化に関連する役割を果たしているため、この種の積荷積載はストレプトミセス属で起こる可能性が高い45,46。

MV 媒介 HGT の考えられるメカニズムは 3 つ提案されています。(i) MV が標的細胞に近づき、その表面の DNA が細胞の自然な能力によって獲得されます。 (ii) 標的細胞の膜に関連する MV は溶解を受け、自然な能力によって DNA が取得されます。 (iii) MV 膜は標的細胞の膜と融合し、カーゴは細胞内に送達されます 42,47。

ゲノム進化における MV DNA の役割は魅力的であり、有望です。 しかし、DNA は MV の外表面に局在する可能性があるため、DNA が主に MV の形成において構造的機能を発揮したり、MV が分泌された後の形状維持のための機械的サポートを提供したりする可能性をアプリオリに排除することはできません。 さらに、Streptomyces MV DNA は、有機および無機基質への菌糸細胞の接着を促進したり、液体培養におけるクランプとペレットの形成を決定する菌糸細胞間相互作用において役割を果たしている可能性があります 48。 MV 内の DNA が HGT 以外の機能を発揮できることは驚くべきことではありません。実際、ヒトの細胞では、細胞外小胞に関連する DNA が、炎症誘発性シグナル伝達の活性化による炎症反応や免疫反応の誘導など、複数の役割を果たすことが知られています。経路、およびアポトーシスを誘導する可能性のある損傷した DNA の除去による細胞恒常性の維持 49。

MV に関連する DNA の生理学的役割に加えて、新しい形質転換法やバイオテクノロジーの応用では、特により普及した遺伝子工学手法に抵抗力のある細菌の場合、MV を介した DNA パッケージングと送達を利用できる可能性があります。 この目的のために、将来の研究では、MV の作成中の DNA 選択に関与する分子機構を特定する必要があります。

私たちは、いくつかの疑問が残されていることを十分に承知しています。 実際、各 MV に (少なくとも) 染色体のコピー全体が含まれているかどうか、断片化されているかどうか、タンパク質によって結合および詰め込まれているかどうかなどを明らかにする必要があります。 それにもかかわらず、我々の意見では、この研究は細菌種、特にストレプトミセス属のようなゲノムが複雑な種の進化に関与するメカニズムの理解にとって重要な前進を示している。 S. coelicolor MV に埋め込まれた DNA が、単一または複数の代謝経路に関与する遺伝子クラスターを含むのに十分な長さである可能性は十分にあります。 もしそうなら、ストレプトミセス属および/またはそれに近い種のゲノムは、長い DNA ストレッチを獲得し、この属に属する細菌の代謝の多様性を特に一貫させることによって急速な進化変化を遂げる可能性があります。

この研究で使用した株は、Streptomyces coelicolor A3(2) M145 (遺伝子型 SCP1- SCP2-)50 でした。 108 個の胞子を種培養用に 30 mL の J 培地 50 に接種し、振盪 (200 rpm) しながら 30 °C で 30 時間インキュベートしました。 収集したバイオマスを滅菌水で２回洗浄し、３０ｍＬの滅菌水に再懸濁した。 次に、細菌懸濁液 10 mL を最小培地 [NaNO3 (1 g/L)、MgSO4・7H2O (0.5 g/L)、KCl (0.5 g/L)、KH2PO4 (1 g/L)] 500 mL に接種しました。 、グルコース（10 g/L）、微量元素溶液（1 mL/L）、pH 7; FeSO4・7H2O (1 g/100 mL)、ZnCl2 (1 g/100 mL)、およびビオチン (0.1 g/100 mL) を含む微量元素溶液] (MM)51、2 L バッフル付きフラスコ中で、 180 rpm で振盪しながら 30 °C で 136 時間。 S.セリカラー膜小胞は、以前に記載されているように単離および精製されました4。 簡単に説明すると、培養上清を濾過し、その後、100 kDa 排除フィルター (Millipore) を備えた Amicon 限外濾過システムを使用して濃縮しました。 次に、4℃、4000 g および 15,000 g で 15 分間連続遠心分離して、凝集体を除去しました。 残った上清を 100,000 g (SW 40 Ti ローター、Beckman Coulter) で 4 °C で 1 時間超遠心分離しました。 ペレットを滅菌リン酸緩衝食塩水（Ca2+およびMg2+を含まないダルベッコのリン酸緩衝食塩水-DPBS-）に懸濁し、OptiPrep溶液（Sigma-Aldrich）と混合して、最終35％v/v OptiPrep溶液を得た。 6 層 (35、30、25、20、15、および 10% v/v) OptiPrep 密度勾配を 14 mL 超遠心分離チューブに設定し、140,000 g で 16 時間、4 °C (SW 40) で超遠心分離しました。 Ti ローター、ベックマン・コールター）。 密度勾配の 6 つの画分 (F1 ～ F6) を収集し、滅菌 DPBS で希釈し、38,400 g (SW 55 Ti ローター、Beckman Coulter) で 4 °C で 2 時間超遠心分離しました。 ペレットを０．２ｍＬの滅菌ＤＰＢＳに懸濁した。 6 つの画分すべて 10 μL を 1% (w/v) アガロースゲル上で視覚化しました。 F3 と F4 には、以前に示したように MV が含まれていたため、その後の手順に使用されました4。 実験を進める前に、DLS 分析を実行して MV の存在を確認しました。

5 μL の F3 および F4 MV を 1 U の DNase I 組換え、RNase フリー (Roche) で処理し、提供された反応バッファーの存在下、最終容量 10 μL でサンプルを 37 °C で 30 分間インキュベートしました。 ＲＮａｓｅによる処理は、５μＬのＦ３およびＦ４ ＭＶおよびＲｎａｓｅ Ａ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して実行され、１０μＬ中１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度で使用された。 この場合、インキュベーションは 37 °C で 1 時間実行されました。 処理サンプルと未処理サンプルを、同量の MV を 1% (w/v) アガロースゲルにロードすることによって比較しました (それぞれ 10 μL の処理サンプルと 5 μL の未処理サンプル)。

Ｆ３およびＦ４ ＭＶの１０μｌアリコートを、製造業者の指示に従って、ＤＮａｓｅ Ｉ組換え、Ｒｎａｓｅフリー（Ｒｏｃｈｅ）またはＲｎａｓｅ Ａ（Ｒｏｃｈｅ）のいずれかで処理した。 処理後、サンプルは 1X トリス-酢酸-EDTA 緩衝液 (TAE) 中で 1% (w/v) アガロースゲル電気泳動によって分析されました。 すぐに使用できる MassRuler DNA Ladder Mix (Thermo Scientific) を DNA ラダーとして使用しました。

SCO7590 (katA2)、SCO0560 (catC)、SCO3671(dnaK)、SCO5820 (hrdB)、および SCOr06 (rrnB) 遺伝子は、表 2 にリストされているプラ​​イマー セットを使用して MV サンプルから増幅されました。反応混合物は 1X PCR バッファー、1.5 mM MgCl2、0.5 μM の各プライマー、0.2 mM dNTP、1 U の Taq DNA ポリメラーゼ組換え体 (Thermo Scientific)、および 1 μL の F3 または F4 をテンプレートとして使用します。 SCO7590、SCO0560、SCO3671、および SCO5820 の増幅には、タッチダウン PCR 条件を次のように適用しました: 95 °C で 3 分間の初期変性、その後 95 °C で 45 秒、66 °C で 30 秒のサイクル72℃で45秒。 95℃で45秒、64℃で30秒、72℃で45秒のサイクル。 95℃で45秒、62℃で30秒、72℃で45秒のサイクル。 95 °C で 45 秒、60 °C で 30 秒、72 °C で 45 秒の 30 サイクル。 72 °C で 10 分間の最終伸長ステップでプログラムを終了しました。 SCOr06 の熱サイクル条件は、94 °C で 3 分間、その後 94 °C で 45 秒、50 °C で 1 分間、72 °C で 90 秒を 30 サイクル、最後に 72 °C で 10 分間でした。

F3 からの DNA は、2 × 150 bp ペアエンド シーケンスを備えた Illumina NextSeq550 プラットフォームを使用して、Genomix4life srl (イタリア、サレルノ) によってシーケンスされました。 インデックス付きライブラリーは、Nextera DNA Flex Kit (Illumina Inc.) を使用して調製しました。 読み取りは Trimmomatic (v. 0.36.4)52 を使用してトリミングされました。アダプターは ILLUMINACLIP オプションを使用して削除され、トリミングは SLIDINGWINDOW および MINLEN (90 に設定) オプションを使用して 2 つのステップで実行されました。 トリミングされたリードは、「-careful」および「-cov-cutoff」（「auto」に設定）オプションを指定した SPAdes (v. 3.12.0)53 を使用してアセンブルされました。 > 1000 bp の長さのコンティグは、補足表 S1 に報告されている Streptomyces coelicolor の参照ゲノムを使用して MeDuSa54 で足場を構築されました。 FastANI (v. 1.3)55 を使用して、足場および参照ゲノム内のオルソロガス遺伝子ペアの平均ヌクレオチド同一性 (ANI) を計算しました。

最後に、トリミングされたリードは、Bowtie2 (v. 2.4.2)56 を使用して S. coelicolor A3(2) (GenBank でアクセッション番号 AL645882.2 で入手可能) の参照染色体配列にマッピングされ、重複したリードは Samtools マークアップ (v. .1.13）57． ゲノム全体のカバー率は、BEDTools (v. 2.30.0) の「genomecov」機能を使用して計算され 58、データは Sushi R パッケージ (v. 1.34.0) を使用して視覚化されました 59。 これらすべての分析は、Galaxy プラットフォームで利用可能なソフトウェアを使用して実行されました60。

この研究の結果を裏付ける生のシーケンスリードは、アクセッション番号 SRR19648592 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/SRR19648592) で Sequence Read Archive (SRA) データベースに保管されています。 BioProject アクセッション番号は PRJNA849152 です。

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この研究は、シチリア地域生産活動地域局（BIAS プロジェクト、POFESR 2014/2020 n. 082015000275 to GG）およびパレルモ大学（FFR 2019-2020 to GG）によって部分的に支援されました。 ATeN センター (Med-CHHAB、PONa3 00273、パレルモ大学) は、技術サポートと研究室のホスピタリティで知られています。

パレルモ大学生物学、化学および薬学科学および技術学部、90128、パレルモ、イタリア

テレサ・ファデッタ、ジュゼッペ・ガロ、アンナ・マリア・プーリア

生物科学および獣医学部、カメリーノ大学、62032、カメリーノ、イタリア

アルベルト・バサロ

フィレンツェ大学生物学部、50019、セスト・フィオレンティーノ、イタリア

サラ・デル・ドゥーカ & レナト・ファニ

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AMP と TF がこのプロジェクトを発案しました。 TF が実験を行いました。 AV と SDD はデータを分析しました。 TFとAVが草稿を書きました。 AMP、GG、RF が原稿をレビューし、編集しました。 AMP、GG、RF がプロジェクトを監督しました。 AMP と GG がプロジェクトに資金を提供しました。 著者全員がその論文を承認した。

アルベルト・バサーロへの手紙。

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

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転載と許可

Faddetta, T.、Vassallo, A.、Del Duca, S. 他 Streptomyces coelicolor 膜小胞が持つ DNA 配列の解明。 Sci Rep 12、16651 (2022)。 https://doi.org/10.1038/s41598-022-21002-z

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受信日: 2022 年 7 月 7 日

受理日: 2022 年 9 月 21 日

公開日: 2022 年 10 月 5 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-21002-z

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